著者

志村 洋一郎 殿塚 隆史 坂野 好幸

出版者

The Japanese Society of Applied Glycoscience

雑誌

応用糖質科学 (ISSN:13403494)

巻号頁・発行日

vol.45, no.4, pp.393-395, 1998

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好熱性放線菌Therrnoactinomyces vulgaris R-47よりクローン化された二つのa-アミラーゼ,TVAIとTVAII,のグルコシルサイクロデキストリン(G1-α-,-β-,-γ-CD)に対する速度論および作用様式の検討を行った.TVAIは,G1-γ-CDに対して,9.0s<SUP>-1</SUP>mM<SUP>-1</SUP>のk<SUB>cat</SUB>/K<SUB>m</SUB>値を示し,Gl-a-,および-β-CDに対するそれよりも100倍以上の値を示した.一方,TVAIIは,3種類のG1-CDに対してほぼ等しいk<SUB>cat</SUB>/K<SUB>m</SUB>値(約0.5s<SUP>-1</SUP>mM<SUP>-1</SUP>)を示した.TVAIとTVAIIの最終G1-CD分解物を,HPLCおよびTLCにおいて確認した.それらは,グルコース,マルトース,パノース,および62-α-グルコシルマルトトリオースと推定された.TVAIとTVAIIのG1-CDに対する作用は,速度論的には異なっているが,その作用様式は類似していた.

著者

坂野 好幸 長畑 直和 藤本 大三郎

出版者

The Japanese Society of Applied Glycoscience

雑誌

澱粉科学 (ISSN:00215406)

巻号頁・発行日

vol.38, no.2, pp.187-192, 1991-06-30 (Released:2011-07-01)

参考文献数

22

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Pseudomonas amyloderamosa isoamylase and Klebsiella pneumoniae pullulanase were crystalline preparations obtained from Hayashibara Biochemical Laboratory, Inc., Okayama, Japan. Bacillus acidopullulyticus pullulanase was purified from Promozyme 200 L (Novo Nordisk Bioindustry, Ltd., Copenhagen, Denmark) by the method of Kusano et al. (Agric. Biol. Chem., 52, 2293). These three enzyme preparations showed a single band on PAGE. Optimum pH of Pseudomonas isoamylase for amylopectin was 3.5 with a shoulder near pH 5. The optimum pH for Br-CDs shifted from 3.5 for amylopectin to 4.5-4.7 (Br-α- and -β-CDs) and 4.0 (G3-, G4-γ-CDs). The pH curve for Br-γ-CDs had a shoulder near pH 5.0. Optimum pHs of Klebsiella and Bacillus pullulanases for pullulan and Br-γ-CDs were 5.5 and 5. 0, but those for Br-α-CDs were 6.0 and 4. 0, respectively. Kinetic parameters of these enzymes for Br-CDs indicated that (1) all of them cleaved more easily the a(1→6) linkages of G3-G5-CDs than those of G2-CDs, (2) they split more easily the a(1→6) linkages of Br-r-CDs than those of the other Br-CDs, (3) Pseudomonas isoamylase hydrolyzed readily the a(1→6) linkage of G2-7-CD and (4) Br-r-CDs were better substrates for kinetical analysis of debranching amylase than amylopectin and pullulan.