著者

葛谷 恒彦 松口 貴子 籾谷 真奈 北尾 悟 杉谷 義憲 カズヤ ツネヒコ マツグチ タカコ モミタニ マナ キタオ サトシ スギタニ ヨシノリ Tsunehiko KAZUYA Takako MATSUGUCHI Mana MOMITANI Satoshi KITAO Yoshinori SUGITANI

雑誌

大阪樟蔭女子大学学芸学部論集

巻号頁・発行日

vol.42, pp.97-105, 2005-03-08

---

生活習慣病の発症・進展に深くかかわる"活性酸素"に着目し、活性酸素を除去する働きがある抗酸化物質が生体内でどのように作用するかを明らかにする目的で、ヒト細胞を用いて酸化障害モデルを作成し、抗酸化物質の細胞障害抑制効果の解析を試みた。 ヒト臍帯静脈血管内細胞を培養し、コンフルエントになったプレートの細胞に活性酸素種(H_2O_2、クメンヒドロペルオキシド)を添加し、濃度・時間依存性に進行する細胞死をLDHアッセイにより測定した。自然死、Tween20による細胞死(100%細胞死)を基準として、細胞障害率を求めた。 酸化傷害を与えた結果、H_2O_2では、0.1mM、0.5mMの負荷で酸化障害率が10%以下、1mMで時間に関係なくほぼ40%、5mM、10mMで50%を超え、1時間後が最も高い数値を示した。クメンヒドロペルオキシドでは、0.1mM、0.5mMの負荷で酸化障害率が20%以下、1mMで70%以上、5mM、10mMでほぼ100%近い値を示し、反応時間別に見ると、全ての濃度で3時間後が最も高い数値を示した。

著者

Tetsuya Oguma Satoshi Kitao Mikihiko Kobayashi

出版者

日本応用糖質科学会

雑誌

Journal of Applied Glycoscience (ISSN:13447882)

巻号頁・発行日

vol.61, no.4, pp.93-97, 2014 (Released:2014-11-20)

参考文献数

20

被引用文献数

8

---

The enzyme cycloisomaltooligosaccharide glucanotransferase (CITase) was isolated from Bacillus circulans U-155, which had a yield of 25.8%, and purified to homogeneity. The Mr was approximately 98,000, similar to that for all known CITases. Specific activity of the purified enzyme was 2.11 U/mg protein, with maximal activity at approximately pH 6.0. The enzyme was stable at pH 4.5 up to pH 9.0 and at temperatures up to 50°C. The main product of the initial enzyme reaction was cycloisomalto-heptaose. The cit gene has a 2,895-bp open reading frame and encodes CITase in B. circulans U-155. We cloned this gene into a recombinant plasmid pCI811 and expressed it in Escherichia coli. A comparison between DNA sequence data from the transformant and the N-terminal amino acid sequence of the purified enzyme from B. circulans U-155 suggested that CITase was translated as a secretory precursor with a 30-amino-acid signal peptide. The mature enzyme contained 934 residues with a predicted molecular mass of 103.93 kDa. The enzyme activity in the transformants was approximately 3.0 mU/mL, similar to that of the purified enzyme secreted by B. circulans U-155. The enzyme also showed 72 and 67% identity with CITase from Paenibacillus sp. 598K and B. circulans T-3040, respectively. These results suggest that the enzyme isolated from B. circulans U-155 shares a greater similarity with CITase expressed by Paenibacillus sp. 598K than B. circulans T-3040.