6 0 0 0 OA 農水産物のゲノム編集技術の今・未来
2 0 0 0 OA ニホンウナギ卵の母性mRNA次世代シーケンスのためのrRNA除去法の検討
- 著者
- 泉 ひかり 萩原 聖士 玄 浩一郎 井尻 成保 足立 伸次
- 出版者
- 北海道大学大学院水産科学研究院
- 雑誌
- 北海道大学水産科学研究彙報 (ISSN:13461842)
- 巻号頁・発行日
- vol.65, no.3, pp.125-130, 2015-12-20
Removal of ribosomal RNAs(rRNA) from total RNA in eggs before preparation of a RNA library is required for the analysis of maternal mRNA using next-generarion sequencing ; this mRNA is essential for normal development. In mammals, the rRNA-depletion method is well-established and is already being used for the development of experiment kits. However, this method is not designed for other species, e.g., non-model organisms. In the current study, we attempted to remove rRNA from total RNA of Japanese eel Anguilla japonica, which is one of the most important aquaculture species in Japan. Removal was performed via hibridization-selection using mammalian probes from a commmercially available kit and/or an ordinally designed eel probe. Quantitative polymerase chain reaction(PCR) was performed to examine the depletion efficiency of 18S rRNA and 28S rRNA were comparative between each method, and >98% depletion was achieved. In addition, RNA-sequencing analysis using a next-generation sequencer and read-mapping analysis were carried out using the rRNA-depleted RNA, which was prepared using a mammalian probe, and mapping analysis revealed that rRNA reads were <1% of the total reads. These results suggest that an rRNA-depletion kit designed for a mammal can also be used for fish species.
1 0 0 0 OA 魚類における卵黄の蓄積・分解・利用機構の解明
- 著者
- 松原 孝博 大久保 信幸 澤口 小有美 玄 浩一郎
- 出版者
- 水産総合研究センター
- 巻号頁・発行日
- no.26, pp.91-97, 2008 (Released:2011-03-05)
1 0 0 0 月周期と同調したカンモンハタの成熟・産卵メカニズムの解明
カンモンハタは月周期と完全に同調した成熟産卵サイクルを持ち、満月大潮直後に生息場である珊瑚礁池から外洋へ移動して産卵する。このような月周期の影響を受けた生殖腺の生理変化及び産卵のための行動は、多くの水生生物で観察されているが、その詳細は明らかにされていない。本研究では、月周期と同調したカンモンハタの成熟・産卵のメカニズムを解明する事を目的に、これまで観察を続けてきた沖縄県本部町瀬底島のフィールドと西表島のフィールドを利用して、本種の成熟過程を産卵場への移動及び産卵行動と関連づけて調べることとした。本研究により得られた主な成果は以下の通りである。1)沖縄県南部の西表島と北部の瀬底島に生息するカンモンハタの生殖特性を比較したところ、本種は共通して月周産卵をすることが確認されたが、成熟サイズ・性転換時期・産卵回数が両地域で異なることがわかった。2)生殖腺刺激ホルモン遺伝子(FSHβとLHβ)の発現を測定するリアルタイムPCR法を確立し、脳下垂体における両遺伝子の測定を可能とした。その結果、LHが本種の生殖腺発達に深く関わることが分かった。3)バイオテレメトリー法により満月大潮前後の産卵関連行動を沖縄県瀬底島と西表島のフィールドを用いて観察したところ、いずれの地域でも産卵に適した場所に移動することが分かった。また、この移動は産卵期にのみ起こることが分かった。4)飼育環境下の個体を用いて月周期と同調した卵成熟の過程を観察し、成熟のタイミングを明らかにすることができた。本研究の成果はカンモンハタの生殖腺発達を理解するだけでなく、種苗生産対象魚として注目されている他のハタ科魚類の生殖腺発達を理解する上でも貴重な情報となる。また、南方系海産魚に多く見られる月周産卵の機構解明にも役立つことが期待される。