著者

畑中 勇輝 井上 貴美子 及川 真実 上村 悟 越後貫 成美 児玉 栄一 大川 恭行 束田 裕一 小倉 淳郎

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

日本繁殖生物学会 講演要旨集 第108回日本繁殖生物学会大会

巻号頁・発行日

pp.OR1-28, 2015 (Released:2015-09-15)

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【目的】哺乳類のゲノム上に広く存在するレトロトランスポゾン(RT)の抑制は,個体発生や生殖細胞の分化に必須である。RTの抑制は主にDNAメチル化が担っているが,ゲノムワイドな低DNAメチル化状態にある始原生殖細胞では,抑制性ヒストンH3K9me3がその役割を担っていると言われている。そこで本研究では,同様にゲノムワイドなDNA脱メチル化が生じる着床前胚におけるRT抑制機構の解明を行った。【方法】ノックアウトまたはノックダウンにより胚発生が停止することが知られているCAF-1に着目した。CAF-1構成因子であるP150 に対するsiRNAの前核期胚への注入によりノックダウン(KD)胚を作製し,解析に供した。また,各抑制性ヒストン修飾酵素のKD胚も同様の方法で作製した。これらの胚を用いて,常法によりChIP解析,遺伝子発現解析などを実施した。【結果】既報の通り,CAF-1 KD胚は桑実期で致死となった。CAF-1 KD胚におけるマイクロアレイ解析では細胞死関連遺伝子の発現増加が認められ,DNA損傷マーカーであるH2AXのリン酸化シグナルの増加およびRT(LINE-1,SINE B2,IAP)の有意な発現上昇が観察された。RT阻害剤添加により胚盤胞期胚への発生は有意に改善出来たことから,CAF-1 KDによる胚性致死はRTの脱抑制と関連することが明らかになった。さらにChIP解析の結果,CAF-1 KD胚では,RT領域におけるH3.3からH3.1/3.2への置換が阻害され,それに伴いH3K9me2/3及びH4K20me3など複数の抑制性ヒストン修飾が減少することが示された。抑制性ヒストン修飾酵素のsiRNA注入実験により,Suv420h1/2により付加されるH4K20me3が着床前胚のRT抑制に主要な役割を果たしている可能性が示された。以上の結果から,グローバルなDNA脱メチル化される着床前胚において,CAF-1による抑制性ヒストン修飾の蓄積を介したRT抑制制御機構の存在が明らかになった。

著者

Kosuke OTAKA Yuuki HIRADATE Norio KOBAYASHI Yoshiki SHIRAKATA Kentaro TANEMURA

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

Journal of Reproduction and Development (ISSN:09168818)

巻号頁・発行日

pp.2015-013, (Released:2015-06-14)

被引用文献数

3

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During mammalian spermatogenesis, spermatogenic cells undergo mitotic division and are subsequently divided into haploid spermatids by meiotic division, but the dynamics of sex chromosomes during spermatogenesis are unclear in vivo. To gain insight into the distribution of sex chromosomes in the testis, we examined the localization of sex chromosomes before and after meiosis in mouse testis sections. Here, we developed a method of fluorescence in situ hybridization (FISH) using specific probes for the X and Y chromosomes to obtain their positional information in histological testis sections. FISH analysis revealed the sex chromosomal position during spermatogenesis in each stage of seminiferous epithelia and in each spermatogenic cell. In the spermatogonia and leptotene spermatocytes, sex chromosomes were distantly positioned in the cell. In the zygotene and pachytene spermatocytes at prophase I, X and Y chromosomes had a random distribution. After meiosis, the X and Y spermatids were random in every seminiferous epithelium. We also detected aneuploidy of sex chromosomes in spermatogenic cells using our developed FISH analysis. Our results provide further insight into the distribution of sex chromosomes during spermatogenesis, which could help to elucidate a specific difference between X and Y spermatids and sex chromosome-specific behavior.

著者

Atsushi TOHEI

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

Journal of Reproduction and Development (ISSN:09168818)

巻号頁・発行日

vol.50, no.1, pp.9-20, 2004 (Released:2004-03-05)

参考文献数

60

被引用文献数

28 49

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In order to clarify the functional relationship between thyroid, adrenal and gonadal hormones, hypothyroidism was induced by administration of thiuoracil in adult male and female rats, and the effects of hypothyroidism on the adrenal and the gonadal axes were investigated in the present study. 1. The functional relationship between thyroid and adrenal hormones: Adrenal weights and corticosterone were lowered, whereas the secretion of ACTH, corticotrophin-releasing hormone (CRH) and arginine vasopressin (AVP) increased in hypothyroid rats compared to euthyroid rats. These results indicate that hypothyroidism causes adrenal dysfunction directly and results in hypersecretion of CRH and AVP from the hypothalamus. 2. The functional relationship between thyroid and gonadal hormones: The pituitary response to LHRH was lowered, whereas the testicular response to hCG was not changed in hypothyroid rats. Hypothyroidism suppressed copulatory behavior in male rats. These results suggest that hypothyroidism probably causes dysfunction in gonadal axis at the hypothalamic-pituitary level in male rats. In adult female rats, hypothyoidism inhibited the follicular development accompanied estradiol secretion, whereas plasma concentrations of progesterone and prolactin (PRL) increased in hypothyroid female rats. Hypothyroidism significantly increased the pituitary content of vasoactive intestinal peptide (VIP) though it did not affect dopamine synthesis. These results suggest that hypothyroidism increases pituitary content of VIP and this increased level of VIP likely affects PRL secretion in a paracrine or autocrine manner. In female rats, inhibition of gonadal function in hypothyroid rats mediated by hyperprolactinemia in addition to hypersecretion of endogenous CRH.

著者

Nguyen Van THUAN Satoshi KISHIGAMI Teruhiko WAKAYAMA

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

Journal of Reproduction and Development (ISSN:09168818)

巻号頁・発行日

vol.56, no.1, pp.20-30, 2010 (Released:2010-03-05)

参考文献数

136

被引用文献数

35 96

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It has now been 13 years since the first cloned mammal Dolly the sheep was generated from somatic cells using nuclear transfer (SCNT). Since then, this technique has been considered an important tool not only for animal reproduction but also for regenerative medicine. However, the success rate is still very low and the mechanisms involved in genomic reprogramming are not yet clear. Moreover, the NT technique requires donated fresh oocyte, which raises ethical problems for production of human cloned embryo. For this reason, the use of induced pluripotent stem cells for genomic reprogramming and for regenerative medicine is currently a hot topic in this field. However, we believe that the NT approach remains the only valid way for the study of reproduction and basic biology. For example, only the NT approach can reveal dynamic and global modifications in the epigenome without using genetic modification, and it can generate offspring from a single cell or even a frozen dead body. Thanks to much hard work by many groups, cloning success rates are increasing slightly year by year, and NT cloning is now becoming a more applicable method. This review describes how to improve the efficiency of cloning, the establishment of clone-derived embryonic stem cells and further applications.

著者

岡崎 哲司 三原 敏敬 JoAnne S Richards Zhilin Liu 島田 昌之

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

日本繁殖生物学会 講演要旨集

巻号頁・発行日

vol.102, pp.2, 2009

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【目的】我々はブタ精液中の細菌数と精子運動性には負の相関関係が存在し、細菌感染の悪影響は細菌増殖抑制作用を示す抗生物質では効果はなく、グラム陰性菌膜成分のLPSを不活化させるPMBにより抑制可能となることを明らかとした。このことから、細菌から放出されるLPSが精子に直接的に影響を与えていると推察されるが、精子の細菌認識について、全く報告がない。そこで、本研究ではLPS及びグラム陽性菌膜成分を認識し、初期免疫応答を司るTLR4及びTLR2の精子での発現と、そのKOマウスを用いて、精子における自然免疫能の役割を解析した。【方法】8週齢の雄マウスの精巣上体から精子を回収し、LPSまたはTLR2リガンドPam3Cysで処理し、精子機能性解析のためのサンプルを経時的に回収した。また、一部の精子は体外受精あるいは人工授精に供試した。【結果】マウス精子においてTLR4とTLR2の発現がmRNA及びタンパク質レベルで認められ、TLR4は先体及び尾部に、TLR2は尾部に局在していた。WTマウスではLPSまたはPam3Cysの添加濃度依存的に運動・生存率は低下し、培養3時間までに先体損傷が観察された。さらに、これらの精子ではNFkBのリン酸化、Caspase-3の活性化が生じ、アポトーシスを誘起していた。一方で、<I>Tlr4-/-</I>マウス精子ではLPS、<I>Tlr2-/-</I>マウス精子ではPam3Cysによる運動性低下、先体反応は全く起こらず、Caspase-3によるアポトーシスも完全に抑制されたが、<I>Tlr4-/-</I>マウス精子にPam3Cys,<I>Tlr2-/-</I>マウス精子にLPS処理するとWTと同様の結果を示した。リガンドを暴露したWTマウス精子を用いた体外受精および人工授精では、受精・卵割率が有意に低下したが、KOマウスでは、それぞれのリガンドに対して受精能低下は起こらなかった。さらに、両遺伝子欠損マウスでは、精子の運動性は長期にわたり維持され高い受精率を示した。以上の結果から、精子は自然免疫能を司るTLR4、TLR2により精液中の細菌感染を認識し、自己の機能性低下やアポトーシスを起こすことで、受精能を低下させていることが初めて明らかとなった。

著者

ボクラベック ポトツカ イザベラ コバルチック イローナ バー ママドゥ マウサ スカラジンスキ ダリウス ヤン

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

日本繁殖生物学会 講演要旨集

巻号頁・発行日

vol.102, pp.1045, 2009

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We demonstrated that LPA is synthesized in endometrium and there is higher LPA concentration and mRNA expression for LPA1 in bovine endometrium during pregnancy than estrous cycle. Thus LPA may contribute to early pregnancy establishment. In <I>in vivo</I> study we investigated LPA effect on conception rate, P4 and PG secretion in heifers. Animals were inseminated 72 h after second PGF2α injection. From Day 15 to 18 after insemination, heifers were treated intravaginally with: saline (control), LPA (1 mg) or VPC32183 (1 mg; n = 8 for each group). Blood samples were collected on the following days after insemination: 0, 6, 12, 15, 16, 17, 18, 21 and 30. Pregnancy was confirmed by USG and <I>per rectum</I> examination on days 30 and 49. LPA administration resulted in increase in P4 and PGE2 concentrations compared to saline and VPC32183 - treated heifers (P<0.05). In saline and LPA-treated groups 6 out of 8 heifers were pregnant, whereas conception rate in VPC32183 – treated heifers was 37% (P<0.05). In <I>in vitro</I> study we examined the effects of LPA on PG secretion and <I>PGES</I> and <I>PGFS</I> mRNA expressions in stromal and epithelial cells of bovine endometrium on Days 16-18 of pregnancy and estrous cycle. LPA increased PGE2 production and <I>PGES</I> mRNA expression in stromal cells at estrous cycle and pregnancy (P<0.05). The overall results indicate that LPA serves as luteotropic factor during early pregnancy stimulating P4 and PGE2 secretion through activation of <I>PGES</I> mRNA transcript expression in stromal cells. Moreover, at pregnancy establishment, endogenous LPA protects CL and embryo development.

著者

小松 武志 坪田 敏男 岸本 真弓 濱崎 伸一郎 千葉 敏郎

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

家畜繁殖研究會誌 (ISSN:09168818)

巻号頁・発行日

vol.40, no.6, pp.j65-j71, 1994

被引用文献数

9 16

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ニホンツキノワグマ(<I>Selenarctos thibetanus japonicus</I>)の捕殺個体27頭から採取した精巣と,捕獲個体13頭の精巣から採取したバイオプシー材料を用いて,性成熟年齢と,未成熟および成熟個体における精子形成の開始および至開始にかかわる幹細胞について検討した.<BR>精巣の大きさ,重量および精細管直径の各値は2~3歳において急激に上昇し,また精巣の組織学的観察により成熟と判断された個体は,1歳で0%,2歳で50%,3歳以上で100%であった.よって生理的な性成熟(春機発動)年齢は,2~3歳であると推定された.<BR>未成熟個体の精細管中には,セルトリ細胞と巨大円形細胞のみが観察された.この後者の細胞は他種の動物で報告されているGonocyteと形態学的に一致した.よってこの細胞は未成熟期から精子形成を開始するための幹細胞であると推察された.<BR>一方成熟個体の精細管中には,Gonocyteと類似する巨大細胞が観察され, Gonocyte-like cellと名付けられた.この細胞は非繁殖期の精細管中に急激に増加した.このような性質は他種の動物で報告されている未分化型A型精祖細胞の性質と類似した.よってこの細胞は未分化型A型精祖細胞であり,成熟期の非繁殖期から精子形成を再開するための幹細胞であると推察された.

著者

宗像 祥久 柴原 秀典 植田 愛美 川原 玲香 白砂 孔明 桑山 岳人 岩田 尚孝

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

日本繁殖生物学会 講演要旨集

巻号頁・発行日

vol.111, pp.AW1-5-AW1-5, 2018

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<p>【目的】卵胞液(FF)は卵子と顆粒層細胞(GC)の共通の環境である。我々は卵子の発生能力とその個体のFFの卵子成熟・発生支持能力の間に高い関係性があることを見出している。FF中にはエクソソームなどの細胞外小胞(EV)が存在しており,近年FF中EV内のmiRNAが卵胞内の細胞に影響するという報告があるが詳細は未だ明らかになっていない。本研究では卵胞発育に関与するFF中EV由来のmiRNAの探索およびその影響について検討した。【方法】(実験1)食肉センター由来ブタ卵巣の卵胞(直径1–3 mm)からFFを採取し,EV除去FFと対照FFを作成した。対照FF又はEV除去FF10%添加培地で卵子卵丘細胞複合体(COCs)を培養し,成熟率と発生率を評価した。(実験2)小(直径1–3 mm)又は大(5–7 mm)卵胞のGCのRNA-seqデータを用いて発現変動遺伝子群のIPA解析から上流因子であるmiRNAを推定した。又,大小卵胞FFからEVを抽出しsmall RNA-seqから得られたmiRNAとの比較で候補miRNAを推定した。(実験3)良好(GC数が多く卵子が高発育)と不良(GC数が少なく卵子が低発育)個体の卵巣からGCとFFを回収し,実験2と同様に候補miRNAを推定した。(実験4)対照FFとEV除去FF添加培地でCOCsを培養し,その卵丘細胞をRNA-seqに供して発現が異なる遺伝子群から上流因子であるmiRNAを推定した。(実験5)実験2–4の候補miRNAから共通miRNAを選抜し,そのmiRNAをEV除去FF添加培地に添加し卵子の能力に及ぼす影響を検証した。【結果】(実験1)EV除去FFに添加により卵子の成熟率と発生率を低下させた。(実験2–5)それぞれの結果の比較からmiR-27b,miR-17,miR-145を候補miRNAとして推定した。成熟培養へのmiR-27b添加は発生率を有意に向上させた。一方miR-17とmiR-145については胚発生率への影響は観察されなかった。</p>

著者

羽田 真悟 長谷川 達也 永岡 謙太郎 南保 泰雄 松井 基純 角田 修男 今川 和彦

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

日本繁殖生物学会 講演要旨集

巻号頁・発行日

vol.104, pp.1022, 2011

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【目的】哺乳類の着床に,gp130ファミリーのサイトカインが関与することが知られている。このファミリーのサイトカインには,マウスにおいて着床に必須もしくは重要とされるLeukemia inhibitory factor(LIF)やInterleukin-11(IL11), IL6などが含まれる。しかし,ウマでは,ゲノム解析は終了しているが,現時点においてLIFに相当する遺伝子はゲノム上になく,IL11に相当する遺伝子は機能する配列として認識されていない。我々は,これまでの研究において着床期のウマの子宮内膜でIL6の発現を確認している。そこで,本研究では,着床におけるIL6発現の経時的変化,子宮の部位による発現量の比較および発現細胞の特定を目的とした。【方法】試験には,サラブレッド種雌ウマ10頭を使用した。排卵日を0日とし,非妊娠13日(C13),妊娠13日(P13),19日(P19),25日(P25)および30日(P30)にそれぞれ2頭ずつから子宮を回収した。子宮は,胚の存在する部位(G)と逆側の子宮角の根元(N)に分けて採材した。また,P30Gにおいては,子宮内膜を卵黄嚢絨毛膜(P30GY)および尿膜絨毛膜(P30GA)と接触する部位に分けて採取した。解析は,リアルタイムPCR法により行い,各子宮内膜サンプル中のIL6 mRNAの発現量を比較した。さらに,免疫組織学的手法により子宮内膜でのIL6タンパク質の産生部位を調べた。【結果】子宮内膜のIL6 mRNAの発現は,P19Gで軽度な増加が認められ,P25GおよびP30Gでは顕著に増加していた。P30Gにおけるその発現は,P30GYと比較してP30GAでより高かった。これらの結果から,IL6 mRNAの発現は,胚の存在により固着後の子宮内膜中に誘導され,その発現は胚のカプセルが融解して胚と子宮内膜が直接接するようになる時期に重要であることが示唆される。さらに,IL6 mRNAの発現は尿膜絨毛膜に接触した部位で高く,IL6タンパク質は子宮内膜上皮の細胞に検出されたことから,IL6は,着床過程において胚と子宮内膜の接着面,特に尿膜絨毛膜との境界面で作用することが示唆され,胎盤形成などの反応に関わるものと考えられる。

著者

田崎 ゆかり 李 和容 崔 健平 アコスタ トマス J. 奥田 潔

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

日本繁殖生物学会 講演要旨集

巻号頁・発行日

vol.103, pp.55, 2010

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【目的】黄体後期のウシ子宮由来プロスタグランジン F2&alpha; (PGF) は強力な黄体退行誘導因子として知られている。子宮の PGF と卵巣のオキシトシン (OT) の間には正のフィードバック機構が存在することが報告されている。しかし、我々はウシに OT アンタゴニストを PGF と同時に投与しても PGF の分泌は抑制されず、むしろ刺激されることを見出した。このことから PGF 分泌に OT は必須でなく、子宮で合成される PGF が局所調節因子として PGF 分泌に作用するという仮説をたてた。本研究では上記の仮説を証明するためにウシ子宮内膜における PGF 分泌への PGF の関与について多角的に検討した。【方法および結果】1) 発情周期各期 (排卵日: Day 0、黄体初期: Days 2-3、黄体形成期: Days 5-6、黄体中期: Days 8-12、黄体後期: Days 15-17、卵胞期: Days 19-21) の子宮内膜組織における PGF レセプター (<I>FPr</I>) mRNA およびタンパク発現を調べた。<I>FPr</I> mRNA 発現は黄体初期と比較して卵胞期に高く、タンパク発現は黄体初期と比較して黄体後期に高かった。また、黄体後期の子宮において FPr タンパク局在は子宮内膜上皮細胞、腺上皮、血管内皮細胞とその周辺ならびに子宮平滑筋にみとめられた。2) 黄体後期の子宮内膜組織における PGF 分泌におよぼす PGF (0.01-1 &mu;M) の影響を組織培養により検討し、EIA により解析した。PGF は黄体後期のウシ子宮内膜組織の PGF 分泌を濃度依存的に刺激した。また、PGF (1 &mu;M) の影響を黄体初期、中期および後期で比較したところ、黄体後期に強かった。さらに、PGF は単離したウシ子宮内膜上皮細胞における PGF 分泌を有意に促進したが、間質細胞に有意な影響をおよぼさなかった。【総括】ウシ子宮内膜によって合成される PGF が局所調節因子として子宮内膜上皮細胞における PGF 分泌を刺激する「自己増幅機構」の存在すること、また、ウシ子宮における PGF の自己増幅は黄体後期に強いことが示唆された。

著者

豊田 裕 横山 峯介 星 冬四郎

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

家畜繁殖研究會誌 (ISSN:04530551)

巻号頁・発行日

vol.16, no.4, pp.152-157, 1971-06-25 (Released:2008-05-15)

参考文献数

19

被引用文献数

218 214

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ICR-JCL系成熟雄マウスの精巣上体尾部から採取した精子をKrebs-Ringer-Bicarbonate液を基本とする 培養液内に懸濁させ,5%CO2,95%空気,温度37°Cの条件で3~120分の種々の時間培養した後,体外受精に供した。卵子としてはHCG注射後16~17時間の過排卵卵子を用いた。その結果,体外に培養された精子は雄から採取直後の精子よりも早く卵子に侵入することが明らかとなり,in vitroにおいてマウス精子の受精能獲得が起こることが示唆された。追記: 本報の投稿後に知ったIwAMATSU&CHANGの最近の報告(J.exp.Zool.175,271,1970)によると,1)精巣上体精子は牛の卵胞液の存在下に授精後約1時間から卵子への侵入を開始し侵入率は授精後5時間まで漸増する。2)牛の卵胞液とともに3~4時間体外培養された精子は新鮮精子よりも早く卵子へ侵入する,ことが報じられている。前報の成績17)に比し侵入時期が早くなっているのは技術的な改良によると推察している。ただし,牛の卵胞液を用いずに精子を前処理する試みはなされていない。

著者

豊田 裕 横山 峯介 星 冬四郎

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

家畜繁殖研究會誌 (ISSN:04530551)

巻号頁・発行日

vol.16, no.4, pp.147-151, 1971-06-25 (Released:2008-05-15)

参考文献数

19

被引用文献数

236 260

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ICR-JCL系成熟雄マウスの精巣上体尾部から採取した精子と,HCG注射後16~17時間の成熟雌マウスの卵管膨大部から採取した過排卵卵子を用いて体外受精を試み受精の初期の過程を観察した。培養液としてはKrebs-Ringer-Bicarbonate液を基本としたものを用い,5%の割合で炭酸ガスを混じた空気の下に37°Cで1/2~5時間培養した。その結果,培養開始後30分では卵子への精子侵入(透明帯通過)は認められなかったが,1時間後には約23%の卵子に侵入がみられ2~5時間後に検査された331個の卵子の約94%に精子侵入がみられた。このうち卵細胞内に明らかに精子が認められ受精の初期の過程にあると認められたものは294個(88.8%)であった。

著者

小泉 稔 堀口 幸太郎 冨田 陽子 KATO Yukio HARIGAYA Toshio

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

家畜繁殖研究會誌 (ISSN:09168818)

巻号頁・発行日

vol.49, no.6, pp.465-472, 2003

被引用文献数

1 7

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In this study, we attempted to examine the presence of prolactin (PRL) messenger ribonucleic acid (mRNA) and protein in the mouse nipple and mammary gland in pregnancy and lactation. PRL-like substances were found by immunohistochemistry using an antibody against the mouse PRL (mPRL) in the sebaceous gland cells of the nipple during late pregnancy and lactation, and the cistern of alveoli in mammary glands during lactation. Western blot analysis of proteins extracted from the nipple and the mammary gland showed immunoreactive bands corresponding to molecular weights of approximate 16 kDa and 32 kDa, respectively. The expression of mRNA for mPRL in the nipple and mammary gland during late pregnancy and lactation was demonstrated by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), Southern blotting, and nucleotide sequence analyses. These results suggest that mPRL mRNA and its translation product are synthesized in the mouse nipple.

著者

新村 末雄 石田 一夫

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

家畜繁殖研究會誌 (ISSN:04530551)

巻号頁・発行日

vol.22, no.3, pp.99-105, 1976

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妊娠5日12時間から16日までのハムスターの子宮に出現する巨細胞をORSINIに従って第1次巨細胞と第2次巨細胞に分け,それぞれについて核酸,たん白質,多糖類,脂肪を染色し,さらに,Acid Pase,Alk Pase,Etase,SDH,各種OH-SDHの組織化学的検出を試みた。<BR>第1次巨細胞は細胞質突起をもっており,妊娠5日12時間にすでに着床腔周辺とエクトプラセンタルコーン付近にみられ,次第に増えてライヘルト膜近くの子宮内膜に分布し網状構造を形成した。この時期の巨細胞にごは赤血球の破片が貧食されていた。妊娠後期には紡錘状となって減少した。第2次巨細胞は多角形で,7日12時間に増殖中のエクトプラセンタルコーンの外側に多数出現し,後に合胞体化して栄養海綿体を形成した。<BR>これらの巨細胞は常に多量のRNAを含有しており,acrolein-SCHIFF陽性たん白質も少量観察された。グリコゲン穎粒は第1次巨細胞では妊娠12日まで,第2次巨細胞では13日まで,いずれも少量認められた。酸性多糖類はまったく検出されなかった。脂肪小滴は第1次巨細胞では8日まで少量認められ,第2次巨細胞では10日から出現し次第に増加した。AcidPase活性は弱かったが,妊娠期間をとおして常に認められた。Alk Pase活性は弱かったが8日まで存在し,9日で痕跡的となり11日に消失した。SDH活性は第1次および第2次巨細胞とも常に弱かった。Etaseと各種OH-SDHは検出されなかった。<BR>以上のことから,ハムスターの巨細胞は従来いわれているように移行性と貧食性をもっており,胞胚の着床や着床腔の拡大に関与していることが示唆されたが&bull;ラットやマウスにみられるようなOH-SDHは検出されなかったので,プロジェステロンの産生は行われていないように思われた。

著者

眞野 友裕 宮木 杏菜 伊川 正人 中村 肇伸

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

日本繁殖生物学会 講演要旨集

巻号頁・発行日

vol.111, pp.AW1-6-AW1-6, 2018

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<p>【目的】精子と卵子は,受精後にリプログラミングを経て胚体外組織を含む全ての細胞に分化できる「全能性」と呼ばれる能力を再獲得する。本研究では,全能性獲得の分子基盤を明らかにするために,全能性細胞で特異的に発現する遺伝子の探索を行い,Zbed3(Zinc-finger BED Domain-containing 3)を同定した。本報告では,Zbed3の生体内での機能を明らかにすることを目的として研究を行った。【方法】着床前胚におけるZbed3のmRNAおよびタンパク質の発現はそれぞれqRT-PCRと蛍光免疫染色を用いて検討した。また,Zbed3ノックアウトマウスは,CRISPR/Cas9システムを用いて作製した。【結果】Zbed3の着床前胚における発現を検討した結果,Zbed3は受精卵から4細胞期胚の間で特異的に発現し,卵細胞膜皮質下に限局していた。Zbed3は,培養細胞を用いた研究から,Wnt/β-cateninシグナルを正に制御することが報告されているが,少なくとも初期胚では,Wnt/β-cateninシグナルの制御には関与しないことが示された。一方,Zbed3の特徴的な細胞内局在は,SCMC(subcortical maternal complex)と呼ばれる複合体の構成成分の局在と酷似していた。また,免疫沈降によりZbed3はSCMCの構成成分であるMater相互作用することが示唆された。これらのことから,Zbed3はSCMCの構成成分である可能性が考えられた。次に,生体内での機能を調べるために,Zbed3のノックアウトマウスを作製した。その結果,メスのZbed3ノックアウトマウスから得られた受精卵では胚盤胞期への発生率が著しく低下すること,また多くの受精卵から不均等な割球を持つ2細胞期が得られることが明らかとなった。以上から,Zbed3は初期発生に必須の母性効果遺伝子であり,均等な割球を持つ2細胞期胚への分裂に重要な役割を果たすことが示唆された。</p>

著者

三浦 瑠璃 江村 菜津子 齋藤 ゆり子 澤井 健

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

日本繁殖生物学会 講演要旨集

巻号頁・発行日

vol.112, pp.P-42-P-42, 2019

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<p>【目的】哺乳動物の初期胚は,桑実期から胚盤胞(BC)期にかけて,内部細胞塊(ICM)と栄養膜細胞(TE)への分化が起こる。SOX2はICM分化に重要な役割を担うと考えられているが,ブタ初期胚におけるSOX2発現動態と胚発生への役割については明らかではない。本研究では,ブタ胚におけるSOX2発現動態とその発現抑制が初期胚発生におよぼす影響について検討した。【方法】ブタIVM卵子および1-細胞期からBC期における<i>SOX2</i> mRNA発現量およびSOX2タンパク質の発現を解析した。次に,ブタ1-細胞期胚にSOX2発現抑制用siRNAを注入する区(SOX2 siRNA 区),Control siRNAを注入する区(Control siRNA 区),siRNAを注入しない区(無処理区)を設け,BC期までの発生率を調べ,BC期での<i>TEAD4</i>および<i>OCT-4</i> mRNA発現量を解析した。また,それら BC期胚の総細胞数およびSOX2発現陽性細胞率を調べた。【結果および考察】<i>SOX2 </i>mRNA発現量は,IVM卵子,1-細胞期,桑実期,BC期に比べ,8-~16-細胞期で有意(<i>P</i> < 0.05)に高い値を示した。SOX2タンパク質は8-細胞期以降の細胞核で発現が認められ,BC期胚においては,ICMと思われる部位に局在が認められた。Control siRNA区およびSOX2 siRNA区の4-細胞期以上への発生率は,無処理区と比較して有意(<i>P </i>< 0.05)に低い値を示したが,BC期への発生率は各処理区間に差は認められなかった。<i>TEAD4</i>および<i>OCT-4</i>発現量は,各処理区間に差は認められなかった。BC期での総細胞数およびSOX2発現陽性細胞率は無処理区に比べ,SOX2 siRNA区で有意(<i>P </i>< 0.05)に低い値を示した。SOX2 siRNA区においてはBC期ICMへのSOX2局在化が認められなかった。本結果より,SOX2はブタ初期胚におけるICM形成に関与する可能性が示された。</p>

著者

武内 歩 加藤 めぐみ 伊藤 和美 木村 建 花田 章 平林 真澄 保地 眞一

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

The Journal of reproduction and development (ISSN:09168818)

巻号頁・発行日

vol.48, no.3, pp.243-248, 2002-06-01

参考文献数

28

被引用文献数

2 9

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The aim of this study was to investigate the effect of Ca²⁺- and Mg²⁺-free culture conditions on induction of spontaneous first cleavage in rat oocytes. Oocytes recovered from superovulated Wistar females 17 h after hCG injection were exposed for 1.5 h to Ca²⁺/Mg²⁺-free, Ca²⁺-free, Mg²⁺-free, or control mKRB medium supplemented with 5 &mu;g/ml cytochalasin-B (CB). The oocytes were then cultured for 4.5 h in control medium containing CB and for 28 h in CB-free control medium. The oocytes exposed to the Ca²⁺/Mg²⁺-free medium (23%) cleaved better than those exposed to Ca²⁺-free (8%), Mg²⁺-free (0%), or control (0%) media. The cleavage rates of oocytes recovered 12, 17 and 22 h after hCG injection and exposed to the Ca²⁺/Mg²⁺-free medium were 4, 17 and 22%, respectively. The efficiency of oocyte activation in 1.25 mM Sr²⁺ treatment for 6 h was not influenced by the culture background of bivalent cations (cleavage rates: both 49% in Ca²⁺/Mg²⁺-free and Ca²⁺-free medium). These results indicate that Ca²⁺/Mg²⁺-free culture condition induced the spontaneous first cleavage of rat oocytes in an age dependent manner, but had no additional effect on Sr²⁺-induced oocyte activation.

著者

八木 千尋 北山 みずほ 坂本 信介 篠原 明男 枝重 圭祐 越本 知大

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

日本繁殖生物学会 講演要旨集

巻号頁・発行日

vol.106, pp.P-39-P-39, 2013

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<b>【目的】</b>宮崎大学フロンティア科学実験総合センターではマウス(<i>Mus</i>属)やラット(<i>Rattus</i>属)とは異なる分類群である<i>Apodemus</i>属の1種,ヨーロッパモリネズミ(<i>Apodemus sylvaticus</i>)を飼育維持している。本種は高脂血症を自然発症し,さらには高コレステロール飼料給与によりアテローム性動脈硬化が誘導される個体や,Ⅱ型糖尿病様の病態を呈する個体が存在することから新たな病態モデル動物候補として特性評価研究を進めている。本研究では自然交配により維持している本種のコロニーを効率的に管理するために必要な,卵子および胚の凍結保存法開発に向けた知見の集積を目的として,卵子および2細胞期胚の水と耐凍剤の膜透過性を評価することによって凍結保存の可能性を検討した。<b>【材料・方法】</b>排卵誘起処理後M-II期卵子と,雄との自然交配を経て得た2細胞期胚を回収し,15℃および25℃でスクロースおよび5種類の耐凍剤(グリセロール,DMSO,エチレングリコール,プロピレングリコール,アセトアミド)添加PB1液に曝露し,経時的な相対体積変化から水透過性(μm/min/atm:Lp)および耐凍剤透過性(×10^–3cm/min:Ps)を算出した。<b>【結果・考察】</b>25℃での卵子および2細胞期胚のLpは,15℃の値よりも2倍以上高かった。 また卵子および2細胞期胚のPsは,グリセロールで0.01~0.05と非常に低く,その他の耐凍剤で0.23~2.26を示し,また15℃よりも25℃で高い値を示した。このことから水と耐凍剤は温度依存的に膜を透過していると考えられた。これらの結果は,マウスで報告されている値と非常に近似しているため,本種における卵子および2細胞期胚の凍結保存法はマウスと同様の手法が適用できる可能性がある。今後はさらに発生の進んだ胚のLpおよびPsを測定するとともに,これらの凍結保存を試みたい。

著者

齋藤 ゆり子 江村 菜津子 三浦 瑠璃 澤井 健

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

日本繁殖生物学会 講演要旨集

巻号頁・発行日

vol.112, pp.P-48-P-48, 2019

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<p>【目的】microRNA(miRNA)はmRNAの翻訳抑制に関与する短鎖ノンコーディングRNAである。我々は,前回の本大会において,miRNA合成関連因子である<i>DROSHA</i>の発現を抑制すると,ブタ初期胚における16-細胞期以降の発生率が低下することを明らかにした。本実験では,<i>DROSHA</i>発現抑制がブタ初期胚の遺伝子発現に及ぼす影響を検討するとともに,それら遺伝子の発現に関与するmiRNAのブタ初期胚での発現動態を調べた。【方法】ブタ1-細胞期胚に,<i>DROSHA</i>発現抑制用siRNAを注入する区(DROSHA siRNA区),いずれの遺伝子の発現も抑制しないControl siRNAを注入する区(Control siRNA区),siRNAを注入しない区(無処理区)を設け,得られた8-細胞期胚における<i>KLF4</i>,<i>DNMT3A</i>および<i>RBL2</i>のmRNA発現量を解析した。次に,<i>KLF4</i>もしくは<i>DNMT3A</i>遺伝子発現を制御することが示唆されているmiR-29b,miR-145および,miR-371について,体外成熟(IVM)後のブタ卵子,1-細胞期から胚盤胞(BC)期のブタ胚における発現量を解析した。【結果および考察】<i>KLF4</i>および<i>DNMT3A</i>発現量は,無処理区に比べDROSHA siRNA区で有意(P<0.05)に低い値を示した。一方,<i>RBL2</i>発現量は各処理区間に差は認められなかった。miR-29b発現量は,IVM卵子からBC期胚のいずれにおいても差は認められなかった。miR-145発現量は,IVM卵子,1-細胞期胚およびBC期胚と比べ,16-細胞期胚において有意(P<0.05)に高い値を示した。miR-371発現量は,IVM卵子および1-細胞期から16-細胞期胚と比べ,桑実期およびBC期で有意(P<0.05)に高い値を示し,また,桑実期胚と比較してBC期胚において有意(P<0.05)に高い値を示した。以上の結果より,初期発生過程で合成されるmiRNAがブタ胚の遺伝子発現を制御する可能性が示された。</p>

著者

石島 芳郎 伊藤 雅夫 田 暢淇

出版者

日本繁殖生物学会

雑誌

家畜繁殖研究會誌 (ISSN:04530551)

巻号頁・発行日

vol.15, no.3, pp.109-111, 1969

被引用文献数

2

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PMSによる家兎の過排卵誘起にestrogen注射を併用することが有効かどうか再検討すると共に,estrogenを併用した場合としない場合の卵巣所見の比較から併用効果の機序について考察を試みた。<BR>40IUのPMSを5日間,計200IU皮下注射し,24時間または48時間経過して交配した過排卵対照区の平均排卵数は21.3~24.1コ,過排卵陽性率50~63.6%に対し,PMS注射最終日に0.1mgのestradiol注射を併用した区の平均排卵数は32.5~37.8コ,過排卵陽性率87.5~100%で,estrogenを併用することにより排卵数が高められる傾向にあった。未破裂卵胞数は,排卵数の多いestrogen併用区は少なく,対照区は多くなっていた。<BR>また,過排卵対照区と併用区について,卵胞を1~1.4mm,1.5~2.4mm,2.5mm以上の3種に分類して経時的に発育程度を比較したが,3種の卵胞数の推移は両区ともまちまちで,わずかに総卵胞数においてestrogen併用区が優っていたにすぎない。<BR>これらの結果から,estrogen併用注射は,外面的には卵胞発育に対し直接影響を与えていないにもかかわらず,未破裂卵胞を減じ排卵数を増加させる効果がみうけられた。